膜-胶10秒钟快速染色溶液
K1014-100ml
K1014-250ml
描述：MemStain瞬时可逆染色液是Dual-Dye染料的水溶液，不含有毒化学品，可对PVDF和NC转移膜，以及聚丙烯酰胺凝胶蛋白进行快速染色。膜灵敏度极高，可检测10 ng蛋白条带，而丽春红膜染色灵敏度为1000 ng，苏丹黑为500 ng。不使用醋酸和甲醇等有毒物质，染色剂直接溶于水。膜染色1-2分钟即可完毕，条带清晰为紫褐色，背景染色极低。新鲜或陈旧的干燥膜均可染色。染色条带清晰不退色，可直接扫描或照相。染色完全可逆，染过的膜在含0.05% Tween 20的封闭液封闭即可脱色，但也可在碱性条件下数秒内完全脱色。不影响后续Western Blot。适用于硝酸纤维素膜、PVDF膜、尼龙膜。用于监测蛋白转膜，膜染色蛋白条带可用做Western Blot内对照。膜染色液可以反复回收使用2-4次。
MemGel Stain染液可直接用于硝酸纤维素膜和PVDF膜快速染色。1：1稀释后可用于聚丙烯酰胺凝胶蛋白染色快速染色。SDS-聚丙烯酰胺凝胶在蒸馏水或甲醇-醋酸溶液中洗涤30分钟，浸入适量的醋酸-甲醇溶液和等量的MemGel Stain Solution染色2-10分钟，可显示蛋白条带。只需在甲醇-醋酸溶液脱色10分钟即可得到背景干净的蛋白条带。50分钟完成染色，灵敏度为50 ng/条带，高于考马斯亮兰方法。凝胶染色液可反复回收使用2-4次。
适用： 染液直接用于硝酸纤维素膜和PVDF膜快速染色。1：1稀释后可用于聚丙烯酰胺凝胶蛋白染色快速染色。监测转膜，染色蛋白条带用做Western Blot内对照。
组成： Dual-Dye 水溶液100 或250 ml。可重复使用2-3次，可染色200-500个mimi-gel转移膜；1：1稀释可配制200或500 ml凝胶染色工作液，并可重复使用2-3次。染200-500个以上mini-gel。
储存： 室温。
安全性：Dual-Dye无特殊毒性，按一般化学品操作规程处理。
PVDF/NC膜染色：
1. 将PVDF膜或NC膜完全浸入染色工作液，室温1-2分钟，膜上出现紫褐色蛋白条带。若蛋白丰富则10秒钟即可达到最佳对比度。没有蛋白条带者表明膜上没有蛋白。
2. 取出膜，扫描或照相。如果染色背景较深，可用蒸馏水清洗背景染色，直到出现满意的对比度。在水中停留更长时间会缓慢洗去部分染色，但条带仍清晰可见。脱色过度可以重新染色。染过色的膜可干燥保存。
3. 将染色膜直接放入含去垢剂的封闭缓冲液中封闭(150 mM NaCl, 20 mM Tris-Cl pH7.4, 5% defat milk, 0.05% Tween 20)。1小时后膜染色将完全褪去，不影响后续Western Blot操作。另外，将膜浸入0.05-0.1N NaOH水溶液中，数十秒内即可完全清除膜染色，不影响后续Western Blot操作。
聚丙烯酰胺凝胶蛋白染色溶液配制：
配制50%甲醇(或乙醇)-2%醋酸溶液：
甲醇(或乙醇) 50 ml (自备)
冰醋酸 2 ml (自备)
蒸馏水 48 ml
室温保存。
配制1X凝胶染色工作液：
MemGel Stain Solution 50 ml
甲醇(或乙醇) 50 ml
冰醋酸 2 ml
室温保存。
聚丙烯酰胺凝胶蛋白染色程序：
1. SDS-聚丙烯酰胺凝胶在蒸馏水或50%甲醇(或乙醇)-2%醋酸溶液中洗涤2次，每次15~30分钟。如果聚丙烯酰胺凝胶不含SDS，可省略洗涤步骤直接进行下面的染色。
2. 凝胶浸入1X凝胶染色工作液，2-3 min即显示紫褐色蛋白条带，10~20 min可达到最大染色。
3. 取出凝胶，放入50%甲醇(或乙醇)-2%醋酸溶液脱色10分钟，直到完全洗去背景染色。
说明：
1. 如果是干燥的PVDF膜，染色前应该先用甲醇或乙醇浸泡湿润，然后用水冲洗。
2. 膜染色可在蛋白转移之后立即进行，或在完成Western Blot后进行。
3. 正如可用DNA或RNA琼脂糖凝胶电泳条带照相判断Southern或Northern Blot加样量一样，膜染色条带极其清晰并与条带蛋白含量成正比，因而可用做Western Blot的内对照。
4. 膜染色或凝胶染色之后，染色液可以回收，装入新容器内，室温或4 ºC保存，可反复使用2-4次。
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