描述：甘油是甘油三酯的水解产物。与游离脂肪酸一样，甘油含量是甘油三酯水解反应的可靠检测指标，但检测更加方便。试剂盒采用优化步骤，检测实体组织、细胞中甘油含量。
原理：在ATP存在下甘油被甘油激酶磷酸化为3-磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化产生过氧化氢；在过氧化物酶作用下生色底物转化为苯醌亚胺，光密度值与甘油浓度成正比。
用途：测定实体组织、细胞中的甘油浓度。
组成 (105次微板测定或30次1 ml比色杯测定)
(1) 裂解液 100 ml
(2) R1试剂 16 ml
(3) R2试剂 4 ml
(4) 4 mmol/L甘油标准品1 ml
4 ºC避光储存3月。
所需设备：酶标仪、生化分析仪或721、722型可见光分光光度计。96孔微板或比色杯光径1cm。最佳工作波长550nm，如无此波长建议优先选用570nm、次选530、490nm。
一 组织细胞裂解
细胞(包括分化的脂肪细胞)裂解
消化、离心收集细胞。或直接在培养皿内裂解。通常6孔板单孔约2x106个细胞，75mm2瓶约1x107细胞。按比例每1~2 x 106细胞加0.1ml裂解液，混匀裂解。
动物组织裂解
切记预先将新鲜组织称重后保存。组织冻存后再解冻称重会导致明显的测量误差。离心管精确称重，加入新鲜组织后再称重，二者相减(即减量称重法)计算组织重量(约50mg)。按比例每1mg组织加10µl裂解液。用~1ml裂解液可保证有效的裂解。用电动高速匀浆器或手动玻璃匀浆器破碎组织。不推荐超声方法因其不能完全和均匀破碎。应根据预试验调整组织细胞加入量。
二. 裂解液处理
1. 取100-500 µl裂解液转移到1.5ml离心管，进行下一步操作。余下的裂解液可用BCA法蛋白定量试剂盒(#P1511)进行蛋白定量或－20ºC储存。
2. 70ºC 10分钟灭活脂肪酶，可能出现絮状沉淀。
室温5000rpm离心5分钟，上层清液即可用于酶学测定。
三 配制工作溶液：按4:1比例，取4 ml试剂R1与1 ml试剂R2混合即可，立即使用或4ºC保存<1天，变色弃去。谨防来源不明但容易发生的甘油污染，可来自操作者本人或标准品液体微粒溅射等。工作液变色弃去。
四 标准品稀释：用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体，将4 mM甘油标准品倍比稀释为1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L，通常取其中4~6管即可，注意设置0浓度对照反应管。
五 甘油测定
1. 参见下表加样。待测样品体积10µl，多加可抑制反应。
2. 37ºC或25ºC 10分钟。反应平衡后颜色在60分钟内稳定。
3. 先用蒸馏水空白管调零，然后测定各管OD值。
4. 绘制标准曲线并计算甘油浓度。Excel作图步骤：各标准管OD值为y轴，标准品浓度为x轴。(1)鼠标左键圈住数据，点击做图向导，选择-散点图-，点击-完成-。(2)鼠标右键点图上的某一点，点击-添加趋势线-，点击-选项-，点击-显示公式-和-R2值-。
5. 以每mg蛋白浓度或细胞数校正甘油三酯含量。
加样表
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96孔微板测定 |
1 ml比色杯测定 |
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空白管 |
标准品 |
样品 |
空白管 |
标准品 |
样品 |
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蒸馏水µl |
10 |
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35 |
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标准品µl |
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10 |
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35 |
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样品µl |
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10 |
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35 |
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工作液µl |
190 |
190 |
190 |
665 |
665 |
665 |
说明：
1. 试剂混浊或空白管OD550nm大于0.2时弃去。
2. 维生素C>0.18g/L、血红蛋白>2g/L、胆红素>0.25g/L、二硫苏糖醇、巯基乙醇、高浓度EDTA干扰测试。
红细胞糖酵解时合成磷酸甘油影响测定。
